熒光定量檢測(cè)服務(wù)(以熒光定量PCR為例)是一種基于實(shí)時(shí)熒光信號(hào)監(jiān)測(cè)的核酸定量分析技術(shù),廣泛應(yīng)用于病原體檢測(cè)、基因表達(dá)分析、腫瘤研究、藥物療效評(píng)估等領(lǐng)域。
熒光定量檢測(cè)服務(wù)通常包括以下環(huán)節(jié):
樣本處理:
接受新鮮或保存完好的細(xì)胞(≥5×10?)、動(dòng)植物組織(≥50mg)、血液(300μL)等樣本。
提供基因組DNA、純化總RNA或反轉(zhuǎn)錄cDNA(OD260/OD280比值在1.9-2.1之間)。
實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì):
根據(jù)客戶需求設(shè)計(jì)引物和探針,或使用客戶提供的序列信息。
確定檢測(cè)模式(絕對(duì)定量/相對(duì)定量)和對(duì)照設(shè)置(陽(yáng)性對(duì)照、陰性對(duì)照、內(nèi)參基因等)。
PCR檢測(cè):
使用專業(yè)熒光定量PCR儀(如羅氏LightCycler PRO,配備7重檢測(cè)通道,支持28種檢測(cè)模式)進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)。
實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)熒光信號(hào),生成擴(kuò)增曲線和Ct值數(shù)據(jù)。
數(shù)據(jù)分析:
通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線或ΔΔCt法計(jì)算目標(biāo)基因的表達(dá)量或拷貝數(shù)。
提供原始數(shù)據(jù)、擴(kuò)增曲線圖及詳細(xì)分析報(bào)告。